Acetyl-HMGB1 (Lys29) Kaninchen-Polyklonaler Antikörper (P09429) für WB, IF/ICC, ELISA

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung des High Mobility Group Protein B1 (HMGB1)

• HMGB1 ist ein hochabundantes, ubiquitär exprimiertes nicht-histonales chromosomales Protein, das als DNA-Chaperon fungiert und Transkription, Replikation, DNA-Reparatur und Genomstabilität reguliert. Es wirkt auch als extrazelluläres schadensassoziiertes molekulares Muster (DAMP) bei Verletzung und Entzündung. Verwandte Referenzen: PMID:33147444, PMID:27362237

• Die subzelluläre Lokalisierung von HMGB1 wird dynamisch reguliert. Unter Basalbedingungen befindet es sich hauptsächlich im Zellkern, pendelt aber kontinuierlich zwischen Zellkern und Zytoplasma. Bei bestimmten Stimuli oder Stress unterliegt es posttranslationalen Modifikationen, einschließlich Acetylierung von Schlüssel-Lysinresten innerhalb seiner Kernlokalisierungssignale (NLS1: aa 28-44, NLS2: aa 179-185), was seine Anreicherung im Zytoplasma und aktive Sekretion über einen unkonventionellen, lysosomenvermittelten Weg fördert. Verwandte Referenzen: PMID:12231511, PMID:17114460

• Acetylierung an Lys29 (K29) ist eine von mehreren kritischen Modifikationen, die den Transport von HMGB1 regulieren. Hyperacetylierung der NLS1-Region, einschließlich K29, stört den Kernimport und erleichtert die Verlagerung von HMGB1 ins Zytoplasma und seine schließliche Freisetzung in den extrazellulären Raum, wo es zytokinähnliche Aktivitäten entfalten kann. Verwandte Referenzen: UniProt P09429

• In der extrazellulären Umgebung bestimmt der Redox-Status von HMGB1 seine Funktion: vollständig reduziertes HMGB1 wirkt als Chemokin, Disulfid-HMGB1 als Zytokin und oxidiertes HMGB1 fördert immunologische Toleranz. Extrazelluläres HMGB1 bindet an Rezeptoren wie RAGE, TLR2 und TLR4, um angeborene Immunantworten zu aktivieren, was es zu einem kritischen Mediator bei Sepsis, Autoimmunerkrankungen und Krebs macht. Verwandte Referenzen: PMID:23446148, PMID:23519706

• HMGB1 spielt auch eine Rolle bei der mikrobiellen Pathogenese, erleichtert den Eintritt von SARS-CoV-2 und anderen Viren und reguliert Autophagie und Inflammasom-Aktivierung. Verwandte Referenzen: PMID:35239449, PMID:22696656

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Aufgrund der reversiblen Natur der Acetylierung sollten Deacetylase-Inhibitoren (z.B. Trichostatin A, Nicotinamid) in Lysepuffer eingeschlossen werden, um acetyliertes HMGB1 während der Probenvorbereitung zu erhalten.
• Für Western Blotting beträgt das erwartete Molekulargewicht von HMGB1 ~25 kDa, aber posttranslationale Modifikationen können leichte Verschiebungen verursachen. Verwenden Sie Zellen in früher logarithmischer Phase oder stimulierte Zellen als positive Kontrollen.
• Bei der Immunfluoreszenz/ICC kann das Acetyl-HMGB1-K29-Signal nach Induktion der Acetylierung (z.B. LPS-Behandlung) im Vergleich zur Kernfärbung in ruhenden Zellen überwiegend zytoplasmatisch oder extrazellulär sein.
• Für ELISA-Anwendungen ziehen Sie in Betracht, diesen Antikörper als Capture- oder Detektionsreagenz in Kombination mit einem pan-HMGB1-Antikörper zu verwenden, um spezifisch acetyliertes HMGB1 in biologischen Flüssigkeiten zu quantifizieren.
• Kreuzreaktivität mit Maus- und Ratten-HMGB1 wurde angezeigt; eine Validierung im relevanten Probensystem wird jedoch empfohlen.

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