Acetyl-Histon H4 (K8) Kaninchen polyklonaler Antikörper (P62805) - WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA, ChIP, ChIP-seq

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von Histon H4

Histon H4 ist eine Kernkomponente des Nukleosoms, der fundamentalen wiederkehrenden Einheit von Chromatin. Nukleosomen wickeln und komprimieren DNA und schränken so die Zugänglichkeit der DNA für zelluläre Maschinerien ein, die DNA als Vorlage benötigen. Durch diese Wechselwirkungen spielen Histone eine zentrale Rolle bei der Transkriptionsregulation, DNA-Reparatur, DNA-Replikation und chromosomaler Stabilität.

Die Zugänglichkeit der DNA wird durch einen komplexen Satz posttranslationaler Modifikationen (PTMs) an Histonen, die kollektiv als „Histone-Code“ bezeichnet werden, sowie durch Nukleosom-Remodelling gesteuert. Histon H4 ist umfangreich modifiziert, insbesondere an seinem N-terminalen Ende, mit Markierungen einschließlich Acetylierung, Methylierung, Phosphorylierung, Citrullinierung und Ubiquitinierung.

Die Acetylierung an Lysin 8 (K8) von Histon H4 – entsprechend Position 9 in der UniProt-Sequenz (P62805) – ist eine gut charakterisierte Modifikation, die mit offenem Chromatin und transkriptioneller Aktivierung assoziiert ist. Diese Modifikation wird dynamisch durch Histon-Acetyltransferasen (HATs) und Deacetylasen (HDACs) reguliert. Verwandte Referenzen: PMID:2474456, PMID:7664735, PMID:19608861.

Histon H4 ist hauptsächlich im Zellkern und auf Chromosomen lokalisiert. In bestimmten Zelltypen, wie Spermatiden, wird beobachtet, dass acetyliertes H4 während spezifischer Entwicklungsstadien im Kern konzentriert ist.

Histon H4 wird durch mehrere Genkopien kodiert, einschließlich HIST1H4A bis HIST1H4L, HIST2H4A/B und HIST4H4, die identische Proteinsequenzen produzieren. Diese hohe Konservierung über Arten hinweg untermauert seine breite vorhergesagte Kreuzreaktivität.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Für ChIP und ChIP-seq sollten Sie die Vernetzungs- und Chromatin-Scherbedingungen optimieren, um die labile Acetyl-Modifikation zu erhalten. Die Verwendung von Histon-Deacetylase-Inhibitoren (z. B. Natriumbutyrat, TSA) während der Zellernte kann die Detektion verbessern.
• Beim Western Blotting (WB) wird empfohlen, sowohl acetyliertes Histon H4-Peptid als auch nicht-acetyliertes Peptid als Blockierungskontrollen einzubeziehen, um die Antikörperspezifität zu bestätigen.
• Da Histon H4 hochkonserviert ist, wird erwartet, dass dieser Antikörper mit einer breiten Palette von Arten kreuzreagiert; jedoch ist eine Validierung im relevanten Probensystem ratsam.
• Für die Immunfluoreszenz (IF/ICC) sollten Fixierungs- und Permeabilisierungsprotokolle sorgfältig evaluiert werden, da das Acetyl-Epitop empfindlich auf harte Behandlungen reagieren kann.
• Bei Verwendung dieses Antikörpers sollte die Chargen-zu-Chargen-Konsistenz überwacht werden, insbesondere bei quantitativen Assays, wie es für polyklonale Reagenzien Standard ist.

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