Acetyl-Histon H4-K16 (P62805) Kaninchen-polyclonaler Antikörper für WB und ELISA – Epigenetikforschung

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von Histon H4

• Nukleosomenkernkomponente: Histon H4 ist einer der vier Kernhistone, die das Nukleosomenoktamer bilden, um das DNA gewickelt ist, um Chromatin zu bilden. Diese grundlegende Struktur schränkt die Zugänglichkeit der DNA ein und reguliert dadurch Transkription, DNA-Reparatur, Replikation und chromosomale Stabilität. Verwandte Referenzen: UniProt P62805
• Subzelluläre Lokalisation: Unter steady-state-Bedingungen ist Histon H4 überwiegend im Kern lokalisiert, eng mit Chromosomen assoziiert. Acetylierung, wie an K16, beeinflusst seine dynamische Lokalisation; beispielsweise wird acetyliertes H4 in Schritt 11-Spermatiden im Kern beobachtet. Verwandte Referenzen: UniProt P62805
• Posttranslationale Modifikationen und der Histon-Code: Histon H4 unterliegt einer Vielzahl von posttranslationalen Modifikationen (PTMs) an seinem N-terminalen Schwanz, einschließlich Acetylierung, Methylierung, Phosphorylierung, Ubiquitylierung und verschiedenen Acylierungsmarkierungen (z. B. Crotonylierung, Butyrylierung, Succinylierung). Diese Modifikationen bilden einen "Histon-Code", der die Chromatinstruktur und Genexpression steuert. Acetylierung an spezifischen Lysinresten, einschließlich K16, ist ein Kennzeichen von transkriptionell aktivem Euchromatin. Verwandte Referenzen: UniProt P62805
• Funktionelle Bedeutung der K16-Acetylierung: Die Acetylierung von H4 an Lysin 16 (H4K16ac) ist besonders kritisch für die höhergeordnete Chromatinfaltung und Transkriptionsregulation. Diese Modifikation neutralisiert die positive Ladung des Lysins, stört internukleosomale Wechselwirkungen und fördert eine offene Chromatinkonformation. Sie ist beteiligt an Dosiskompensation, DNA-Schadensreparatur und zellulärem Altern. Verwandte Referenzen: PMID:2474456, PMID:7664735, PMID:19608861 (allgemeine Acetylierung in Histonen)
• Evolutionäre Konservierung: Die Aminosäuresequenz von Histon H4 ist über Eukaryoten von Hefe bis zum Menschen bemerkenswert konserviert, was die breite vorhergesagte Kreuzreaktivität dieses Antikörpers begründet. Verwandte Referenzen: UniProt P62805

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Überlegungen zum Immunogendesign: Der Antikörper wurde gegen ein synthetisches acetyliertes Peptid erhoben, das den Resten um Lysin 16 des menschlichen Histons H4 entspricht. Dieses Design gewährleistet Spezifität für den acetylierten Zustand von K16; dennoch sollte die Kreuzreaktivität mit unmodifiziertem H4 oder anderen acetylierten Lysinen in Ihrem experimentellen System überprüft werden.
• Richtlinien für Western Blot (WB): Bei der Durchführung von WB verwenden Sie bevorzugt Ganzzell-Hisonextrakte oder säureextrahierte Histone aus menschlichen, Maus- oder Rattenzellen, da eine breite Kreuzreaktivität vorhergesagt wird. Aufgrund des geringen Molekulargewichts (~11 kDa) verwenden Sie 15% SDS-PAGE oder Gradientengele für eine optimale Auflösung. Validieren Sie die Spezifität durch Vergleich der Signale mit nicht-acetylierten Kontrollen oder durch Verwendung von Deacetylase-Inhibitoren (z. B. TSA, Natriumbutyrat), um die Zielbindung zu bestätigen.
• ELISA-Anwendungen: Dieser Antikörper kann für die ELISA-basierte Detektion von acetylierten H4-Peptiden oder gereinigten Histonen geeignet sein. Bestätigen Sie optimale Beschichtungs-Antigenkonzentrationen und erwägen Sie die Blockierung mit nicht-phospho/nicht-acetyl Blockierungspuffern, um den Hintergrund zu reduzieren.
• Spezieskreuzreaktivität: Basierend auf der hohen evolutionären Konservierung der Histon-H4-Sequenz wird eine breite Kreuzreaktivität vorhergesagt. Obwohl der Antikörper nachweislich mit Mensch, Maus und Ratte reagiert, wird eine Überprüfung bei anderen Spezies aufgrund potenzieller PTM-Unterschiede empfohlen.
• Allgemeiner technischer Hinweis: Wie bei allen PTM-spezifischen Antikörpern stellen Sie bei der Probenvorbereitung sicher, dass die endogene Deacetylaseaktivität minimiert wird (z. B. fügen Sie HDAC-Inhibitoren zum Lysepuffer hinzu), um das Acetylierungssignal zu erhalten.

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