Acetyl-Histon H4 (K12) Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P62805

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Histon H4 Funktion und Lokalisierung

Histon H4 ist eines der vier Kernhistone, die das Nukleosom bilden, die grundlegende repetitive Einheit des Chromatins. Als hochkonserviertes Strukturprotein spielt es eine wesentliche Rolle bei der Verpackung und Organisation von DNA im Zellkern und beeinflusst direkt die Genexpression, DNA-Replikation, Reparatur und chromosomale Stabilität.

Verwandte Referenzen: UniProtKB P62805

Die Funktion von Histon H4 wird dynamisch durch eine Vielzahl von posttranslationalen Modifikationen (PTMs) reguliert, die kollektiv als 'Histon-Code' bezeichnet werden. Acetylierung an spezifischen Lysinresten, einschließlich Lysin 12 (K12, entsprechend K13 in UniProt P62805), ist eine wichtige epigenetische Markierung, die die Chromatinstruktur moduliert und aktive Transkription fördert. Die Acetylierung an diesem Rest wurde in mehreren Studien dokumentiert.

Verwandte Referenzen: PMID:17967882 PMID:2474456 PMID:7664735 PMID:19608861

Die subzelluläre Lokalisierung von Histon H4 ist überwiegend nukleär, wo es mit chromosomaler DNA assoziiert. Spezifische Acetylierungsmuster, wie bei K12, können seine Lokalisierungsdynamik während Prozessen wie der Spermatogenese beeinflussen.

Verwandte Referenzen: UniProtKB P62805

Strukturell ist das Histon H4-Protein etwa 11,4 kDa schwer und wird durch mehrere Genkopien (z.B. H4C1, H4C2, etc.) kodiert, die eine identische Proteinsequenz erzeugen. Diese Vielfalt gewährleistet die für den Chromatinaufbau erforderlichen hohen Expressionsniveaus. Aufgrund der extremen evolutionären Konservierung der Histon H4-Sequenz über Spezies hinweg zeigen Antikörper, die gegen dieses Protein gerichtet sind, oft eine breite Kreuzreaktivität.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Immunogen-Design: Dieser Antikörper wurde gegen ein synthetisches acetyliertes Peptid um K12 hergestellt. Für den spezifischen Nachweis ist zu beachten, dass der Antikörper möglicherweise bevorzugt die acetylierte Form erkennt; die Validierung mit Deacetylase-Inhibitor-behandelten Proben kann das Signal verstärken.
• Western Blotting (WB): Histon H4 hat ein niedriges Molekulargewicht (~11 kDa). Verwenden Sie 15%ige oder Gradienten-SDS-PAGE-Gele und stellen Sie einen effizienten Transfer sicher (z.B. nächtlicher Nass-Transfer bei niedriger Spannung), um den Verlust kleiner Proteine zu verhindern. Fügen Sie geeignete Molekulargewichtsmarker hinzu und bestätigen Sie bei Bedarf die Spezifität mithilfe von Wettbewerbsassays mit nicht-acetylierten Peptiden.
• Immunhistochemie (IHC-P) & Immunfluoreszenz (IF/ICC): Die Antigen-Demaskierung (z.B. Citratpuffer, pH 6,0) kann die Zugänglichkeit des Epitops verbessern. Verwenden Sie positive Kontrollgewebe mit aktiver Transkription oder Proliferation (z.B. Hoden, Thymus) und blockieren Sie endogenes Biotin oder Peroxidasen gemäß Standardprotokollen.
• ELISA: Für die quantitative Analyse beschichten Sie Platten mit acetyliertem H4-Peptid oder Histonextrakten und überprüfen Sie die Peptidspezifität mithilfe von nicht-acetylierten Kontrollen.
• Kreuzreaktivität: Es wird vorhergesagt, dass der Antikörper mit acetyliertem Histon H4 von Human, Maus, Ratte und vielen anderen Spezies kreuzreagiert. Validieren Sie in Ihrem experimentellen System, um eine Bindung an nicht-acetyliertes H4 oder andere acetylierte Proteine auszuschließen, insbesondere angesichts der polyklonalen Natur des Antikörpers.
• Alternative Ansätze: Wenn hohe Spezifität nur für die Acetyl-K12-Markierung erforderlich ist, ziehen Sie die Verwendung eines monoklonalen Antikörpers in Kombination oder spezifische Wettbewerbsassays zur Bestätigung der Epitoperkennung in Betracht.

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