Acetyl-Histon H3 (Lys4) Kaninchen monoklonaler Antikörper für WB, ChIP, IF | Q16695/P68431

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von Histon H3

• Histon H3 ist eine Kernkomponente des Nukleosoms, das DNA wickelt und zu Chromatin verdichtet. Dies begrenzt die Zugänglichkeit der DNA für zelluläre Maschinen, die DNA als Vorlage benötigen, und spielt damit eine zentrale Rolle bei der Transkriptionsregulation, DNA-Reparatur, DNA-Replikation und chromosomalen Stabilität. Verwandte Referenzen: UniProtKB Q16695, UniProtKB P68431

• Die Zugänglichkeit der DNA wird durch ein komplexes Array posttranslationaler Modifikationen (PTMs) an Histonen, kollektiv als „Histon-Code“ bezeichnet, und Nukleosom-Remodelling gesteuert. Diese PTMs umfassen Acetylierung, Methylierung, Phosphorylierung, Citrullinierung, ADP-Ribosylierung und verschiedene Acylierungen. Verwandte Referenzen: PMID:19608861, PMID:16267050, PMID:17194708

• Histon H3 lokalisiert hauptsächlich im Zellkern und ist während des gesamten Zellzyklus mit Chromosomen assoziiert. Verwandte Referenzen: UniProtKB Q16695, UniProtKB P68431

• Während das kanonische Histon H3.1 (codiert durch mehrere Gene, z. B. HIST1H3A) breit exprimiert wird, wird die H3.1t-Variante (H3-4, HIST3H3) spezifisch in testikulären Zellen exprimiert, was auf spezialisierte Rollen bei der Chromatinorganisation während der Spermatogenese hindeutet. Verwandte Referenzen: UniProtKB Q16695

• Die Acetylierung von Lysin 4 an Histon H3 (H3K4ac) ist eine gut charakterisierte Modifikation, die mit aktiven Promotoren und offenem Chromatin assoziiert ist. Sie koexistiert oft mit anderen aktivierenden Markierungen und wird von bromodomainhaltigen Proteinen gelesen, um die transkriptionelle Aktivierung zu erleichtern.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches acetyliertes Peptid, das den Resten rund um K4 von menschlichem Histon H3 entspricht. Aufgrund der hohen Konservierung des N-terminalen Schwanzes zwischen den Arten wird eine Kreuzreaktivität mit Maus- und Rattenproben vorhergesagt; es ist jedoch ratsam, die Leistung im spezifischen experimentellen Modell zu überprüfen.

• Für ChIP-Assays sollten Sie die Antikörperspezifität mit acetylierten und nicht-acetylierten Kompetitorpeptiden validieren, um die Anreicherung an Zielloci zu bestätigen.

• Beim Western Blot wandert Histon H3 bei ca. 15 kDa. Optimieren Sie den Gelanteil und die Transferbedingungen für Proteine mit niedrigem Molekulargewicht; Kern- oder säureextrahierte Proteinlysate werden für ein angereichertes Signal empfohlen.

• Für die Immunfluoreszenz testen Sie verschiedene Fixierungs- (z. B. 4 % PFA gegenüber Methanol) und Permeabilisierungsprotokolle, da diese die Epitopzugänglichkeit und den Hintergrund beeinflussen können.

• Angesichts der Vielzahl von Modifikationen am H3-N-Terminus stellen Sie sicher, dass die Detektion durch benachbarte PTMs nicht beeinträchtigt wird, indem Sie geeignete Kontrollen und, wenn möglich, mutante Histone oder rekombinante Proteine verwenden.

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