Acetyl-Histon H3-K9/K14/K18/K23/K27 Kaninchen-Polyclonal-Antikörper (Q16695/P68431) für WB, IF/ICC, ELISA

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von Histon H3

Histon H3 ist ein Kernbestandteil des Nukleosoms, der fundamentalen Wiederholungseinheit des Chromatins. Als Teil des Histon-Oktamers spielt es eine wesentliche Rolle beim Wickeln und Verdichten der DNA, wodurch die Zugänglichkeit der DNA für die zelluläre Maschinerie, die DNA als Vorlage benötigt, begrenzt wird. Diese strukturelle Grundlage ermöglicht es Histonen, die Transkription, DNA-Reparatur, DNA-Replikation und Chromosomenstabilität zentral zu regulieren.

Der N-terminale Schwanz von Histon H3 unterliegt umfangreichen posttranslationalen Modifikationen (PTMs), einschließlich Acetylierung, Methylierung, Phosphorylierung und anderen, die einen komplexen „Histoncode“ bilden. Diese Modifikationen steuern dynamisch die Chromatinarchitektur und Genexpression. Insbesondere ist bekannt, dass die Acetylierung an den Lysinresten 9, 14, 18, 23 und 27 die positive Ladung der Lysine neutralisiert und so die Wechselwirkung zwischen Histonen und DNA schwächt. Dies führt zu einer offeneren Chromatin-Konformation (Euchromatin) und ist stark mit der Transkriptionsaktivierung verbunden. Die Acetylierungsmarkierungen an diesen Stellen werden von bromodomainhaltigen Proteinen und Chromatin-Remodelern erkannt, was die Rekrutierung der Transkriptionsmaschinerie erleichtert. Zugehörige Referenzen:

• PMID:16627869
• PMID:19608861

Histon H3 ist hauptsächlich im Zellkern und auf Chromosomen lokalisiert, wo es während der DNA-Replikation (für replikationsabhängige Varianten wie H3.1) oder auf replikationsunabhängige Weise (für Ersatzvarianten) in das Chromatin eingebaut wird. Das kanonische H3.1-Protein (kodiert durch mehrere Gene, darunter HIST1H3A–J) wird in vielen Geweben exprimiert, während die testis-spezifische H3.1t-Variante (H3-4, kodiert durch HIST3H3) in Hoden-Zellen vorkommt. Beide Varianten teilen die konservierte N-terminale Schwanzsequenz, die die acetylierten Lysine enthält, auf die dieser Antikörper abzielt.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches acetyliertes Peptid, das K9, K14, K18, K23 und K27 von menschlichem Histon H3 umfasst. Dieses Multi-Site-Design kann eine breite Detektion von hyperacetyliertem H3 ermöglichen; erwägen Sie die Überprüfung der Spezifität mit nicht-acetylierten Peptidkontrollen in kompetitiven Assays.
• Für Western Blots können Säureextraktion von Histonen oder chromatinangereicherte Fraktionierung das Signal-Rausch-Verhältnis verbessern; eine Beladungsnormalisierung mit einem Antikörper gegen totales Histon H3 wird empfohlen, um eine mögliche Epitopmaskierung durch andere PTMs zu berücksichtigen.
• Bei Immunfluoreszenz/ICC kann die Permeabilisierung mit Triton X-100 oder Digitonin die Antikörperpenetration in den Zellkern verbessern; die Fixierungsbedingungen sollten optimiert werden, um die Epitopzugänglichkeit und Morphologie auszubalancieren.
• ELISA-Anwendungen können von der Einbeziehung von sowohl acetylierten als auch nicht-acetylierten Peptidbeschichtungen profitieren, um eine selektive Bindung zu bestätigen.
• Die vorhergesagte Kreuzreaktivität mit Mensch, Maus, Ratte und anderen Spezies deutet auf eine Nützlichkeit in mehreren Modellsystemen hin; eine Validierung im spezifischen Probensystem und experimentellen Kontext ist jedoch unerlässlich.

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