Acetyl-Histone H3-K27 Kaninchen monoklonaler Antikörper (Q16695/P68431) für WB, ChIP, IF, IHC

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Histone H3 (H3.1/H3.1t) Funktion und Lokalisierung

• Histon H3 ist eine Kernkomponente des Nukleosoms, der fundamentalen Wiederholungseinheit des Chromatins. Nukleosomen wickeln und komprimieren DNA und regulieren so den Zugriff auf das genetische Material für Transkription, DNA-Replikation, -reparatur und -rekombination. Diese Architektur ist für die chromosomale Stabilität und die ordnungsgemäße Zellfunktion unerlässlich. Verwandte Referenzen: UniProt Q16695, UniProt P68431.

• Beim Menschen existieren mehrere nicht-allelische Histon-H3-Varianten, einschließlich der kanonischen replikationsabhängigen H3.1-Proteine (codiert durch Gene wie H3C1, H3C2 usw., GenIDs: 8350, 8290) und der testisspezifischen H3.1t-Variante (codiert durch H3-4, auch bekannt als H3FT, HIST3H3). Das kanonische H3.1 ist ubiquitär exprimiert, während die Expression von H3.1t auf testikuläre Zellen beschränkt ist. Verwandte Referenzen: UniProt Q16695 (Gewebsspezifität).

• Sowohl H3.1 als auch H3.1t lokalisieren im Zellkern und assoziieren mit Chromosomen. Sie enthalten eine Histon-Falt-Domäne, die ihren Einbau in Nukleosomen vermittelt, und einen N-terminalen Schwanz, der aus dem Nukleosom herausragt und als Plattform für eine Vielzahl posttranslationaler Modifikationen (PTMs) dient. Verwandte Referenzen: UniProt P68431.

• Der N-terminale Schwanz von Histon H3 unterliegt umfangreichen PTMs, einschließlich Acetylierung, Methylierung, Phosphorylierung, Citrullinierung und anderen, die kollektiv als „Histon-Code“ bekannt sind. Diese Modifikationen orchestrieren die Chromatindynamik und Genexpressionsmuster. Die Acetylierung von Lysinresten, wie an Position 27 (K27), ist ein Kennzeichen aktiver Chromatinregionen, einschließlich Enhancer und Promotoren, und erleichtert eine offene Chromatinkonfiguration, die die Genaktivierung fördert. Verwandte Referenzen: UniProt P68431 (PTM-Übersicht).

• Der hier beschriebene Antikörper wurde gegen ein synthetisches Peptid erzeugt, das dem acetylierten Lysin 27 von humanem Histon H3 (Isoform H3.1, NP_003520.1) entspricht. Er erkennt spezifisch die acetylierte Form und eignet sich zum Nachweis dieser Modifikation in einer Vielzahl von Anwendungen.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Dieser Antikörper wurde unter Verwendung eines synthetischen acetylierten Peptidimmunogens erzeugt; berücksichtigen Sie, dass er das Epitop sowohl in linearer (denaturierter) als auch in nativer Konformation erkennen kann, was ihn für Anwendungen wie Western Blot (WB), Immunpräzipitation und chromatinsbasierte Assays geeignet macht.
• Für WB beträgt das vorhergesagte Molekulargewicht von Histon H3 ~15 kDa. Histone können jedoch je nach Gelbedingungen anomal migrieren; fügen Sie geeignete Positivkontrollen (z. B. HeLa-Ganzzellextrakt) und Molekulargewichtsmarker hinzu.
• Bei Chromatin-Immunpräzipitation (ChIP) und CUT&Tag-Anwendungen bestätigen Sie die Spezifität und Effizienz des Antikörpers durch Durchführung von Peptid-Wettbewerbsassays und Einbeziehung bekannter Zielloci (z. B. aktive Enhancer, die durch H3K27ac markiert sind) als Positivkontrollen.
• Aufgrund der breit vorhergesagten Kreuzreaktivität (Mensch, Maus, Ratte und andere) kann dieser Antikörper für verschiedene Spezies geeignet sein, eine Validierung im spezifischen Probensystem wird jedoch empfohlen.
• Für Immunfluoreszenz (IF/ICC) und Immunhistochemie (IHC-P) kann die Zugänglichkeit des Epitops durch Fixierungs- und Permeabilisierungsprotokolle beeinflusst werden; eine Optimierung dieser Schritte wird empfohlen.
• Die Leistung des Antikörpers in ELISA und Dot Blot (DB) kann unter Verwendung von acetylierten gegenüber nicht-acetylierten Peptiden bewertet werden, um die Spezifität zu beurteilen.

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