Acetyl-Histon H3-K18 Kaninchen-monoklonaler Antikörper (Q16695/P68431) | Validiert für WB, IHC, ChIP, ELISA

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von Histon H3

• Histon H3 ist ein kernnukleosomales Kernprotein, das DNA zu Chromatin einwickelt und verdichtet. Es schränkt die Zugänglichkeit für DNA-abhängige Maschinen ein und spielt eine zentrale Rolle bei der Transkriptionsregulation, DNA-Reparatur, DNA-Replikation und chromosomalen Stabilität. Verwandte Referenzen: UniProtKB Q16695, UniProtKB P68431

• Es lokalisiert im Zellkern und assoziiert mit Chromosomen. Verwandte Referenzen: UniProtKB Q16695, UniProtKB P68431

• Das kanonische H3.1 wird von mehreren Genen kodiert (z. B. H3C1, H3C2) und replikationsabhängig in somatischen Zellen exprimiert. Die Variante H3.1t (Q16695) wird spezifisch in Hodenzyten exprimiert. Verwandte Referenzen: UniProtKB Q16695

• Histon H3 erfährt umfangreiche posttranslationale Modifikationen, die den "Histon-Code" bilden. Die Acetylierung an K18 (Position 19 in der kanonischen H3-Sequenz) ist eine Schlüsselmarkierung, die mit Transkriptionsaktivierung und DNA-Reparatur verbunden ist. Diese Modifikation wird dynamisch durch HATs und HDACs reguliert. Die Acetylierung an dieser Stelle wurde in mehreren Studien nachgewiesen. Verwandte Referenzen: PMID:19608861, PMID:16267050, PMID:16627869, PMID:17194708, PMID:35939806

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches acetyliertes Peptid um K18 des menschlichen Histon H3. Der resultierende Kaninchen-monoklonale Antikörper soll spezifisch acetyliertes H3K18 erkennen, ohne Kreuzreaktion mit nicht modifiziertem K18 oder anderen Acetylierungsstellen. Validieren Sie die Spezifität sowohl mit acetylierten als auch nicht acetylierten Peptid-Konkurrenzassays oder durch Behandlung von Zellen mit HDAC-Inhibitoren.
• Für Western Blotting (WB) wird eine einzelne Bande bei ~16 kDa erwartet. Verwenden Sie geeignete Ladekontrollen (z. B. Gesamt-Histon H3 oder H3-C-terminale Antikörper) um die Acetylierungslevel zu normalisieren. Acetylierungssignale können durch Behandlung von Zellen mit Deacetylase-Inhibitoren wie Trichostatin A (TSA) oder Natriumbutyrat verstärkt werden.
• Für Immunhistochemie (IHC-P) und Immunfluoreszenz (IF/ICC) optimieren Sie die Bedingungen für Antigen-Retrieval und Permeabilisierung. Für IHC-P wird das Löschen endogener Peroxidase empfohlen. Validieren Sie die Färbung durch Vergleich mit Isotypkontrollen.
• Für Chromatin-Immunpräzipitation (ChIP) stellen Sie sicher, dass die Quervernetzungsbedingungen für Histonmodifikationen optimiert sind. Verwenden Sie geeignete positive und negative Kontrollloci (z. B. aktiv transkribierte Gene gegenüber stillgelegten Loci). Die Anreicherungseffizienz kann durch qPCR überprüft werden.
• Aufgrund der vorausgesagten breiten Kreuzreaktivität (Mensch, Maus, Ratte und andere) bestätigen Sie die Reaktivität in der interessierenden Spezies bevor Sie mit großangelegten Experimenten fortfahren. Sequenzalignments zeigen eine hohe Konservierung der Region um K18 bei Wirbeltieren.
• Für ELISA- und Dot-Blot (DB)-Anwendungen kann der Antikörper zum Nachweis von acetylierten H3K18-Peptiden oder rekombinanten Histonen verwendet werden. Erwägen Sie die Verwendung eines biotinylierten sekundären Antikörpers und Streptavidin-HRP zur Signalverstärkung.

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