Acetyl-Histon H3 (K14) Kaninchen polyklonaler Antikörper | Q16695 / P68431 | WB, IF/ICC, ELISA

Wichtige Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von Acetyl-Histon H3 (K14)

Histon H3 ist ein Kernbestandteil des Nukleosoms, das DNA einwickelt und zu Chromatin verdichtet. Dies begrenzt die Zugänglichkeit der DNA für die Transkriptionsmaschinerie und reguliert dadurch Transkription, DNA-Reparatur, Replikation und chromosomale Stabilität. Posttranslationale Modifikationen von Histonen, zusammenfassend als Histon-Code bezeichnet, modulieren die Chromatinstruktur und -funktion.

Zugehörige Referenzen:

• Die Acetylierung an Lysin 14 (K14ac) von Histon H3 ist eine gut charakterisierte Markierung, die mit transkriptionell aktivem Chromatin assoziiert ist. Sie wird durch Histon-Acetyltransferasen wie GCN5/PCAF abgelagert und durch Histon-Deacetylasen entfernt. K14ac erleichtert wahrscheinlich die Chromatin-Entspannung durch Neutralisierung der positiven Ladung von Lysin, wodurch Histon-DNA-Interaktionen reduziert werden.

Zugehörige Referenzen: PMID:16185088, PMID:16267050, PMID:16457588

• Histon H3 ist primär im Zellkern und in Chromosomen lokalisiert. Das kanonische Histon H3.1 (kodiert durch mehrere Gene, SWISS P68431) ist replikationsabhängig und wird während des gesamten Zellzyklus exprimiert. Im Gegensatz dazu wird die testisspezifische H3.1t-Variante (SWISS Q16695) in Hodenzellen exprimiert und ersetzt das kanonische H3.1 während der Spermatogenese.

Zugehörige Referenzen:

• Dieser Antikörper wurde gegen ein synthetisches acetyliertes Peptid erzeugt, das den Resten um K14 des humanen Histons H3.1 (NP_003520.1) entspricht. Er erkennt die acetylierte Form von Lysin 14 sowohl bei H3.1- als auch bei H3.1t-Isoformen und ermöglicht so Studien zu K14ac in verschiedenen biologischen Kontexten.

Zugehörige Referenzen: PMID:19608861

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Western Blot (WB): Für einen optimalen Nachweis der Histon H3 K14-Acetylierung sollten Histone durch Säureextraktion aus Zellen angereichert werden, die mit Histon-Deacetylase-Inhibitoren (z. B. Trichostatin A, Natriumbutyrat) behandelt wurden, um die Acetylierungsniveaus zu erhöhen. Verwenden Sie ein 15% SDS-PAGE-Gel zur Auftrennung. Validieren Sie die Antikörperspezifität durch kompetitive Hemmung mit dem acetylierten Peptid oder durch Vergleich der Signale von Wildtyp- und mit HDAC-Inhibitoren behandelten Proben.
• Immunfluoreszenz/ICC: Fixieren Sie die Zellen mit 4% Paraformaldehyd und permeabilisieren Sie mit 0,1% Triton X-100. Eine Methanolfixierung kann ebenfalls verwendet werden. Stellen Sie sicher, dass geeignete Kontrollen, wie z. B. Peptid-Kompetition, vorhanden sind, um die nukleären Färbungsmuster zu bestätigen.
• ELISA: Verwenden Sie den Antikörper zum Nachweis von acetylierten Histon H3-Peptiden in plattenbasierten Assays. Kombinieren Sie ihn mit einem Pan-H3-Antikörper zur Normalisierung.
• Es wird vorhergesagt, dass der Antikörper aufgrund der hohen Sequenzkonservierung um K14 mit einer Vielzahl von Spezies reagiert; eine Validierung in Nicht-Human-, Maus- oder Rattenproben wird jedoch empfohlen.

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