Acetyl-Histon H3-K14 Kaninchen monoklonaler Antikörper (Q16695/P68431) für WB, ChIP, ELISA

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von Histon H3

• Histon H3 ist eine Kernkomponente des Nukleosoms, der fundamentalen Einheit des Chromatins, die DNA verpackt und den Zugang für Transkription, Replikation, Reparatur und chromosomale Stabilität reguliert. Nukleosomen bestehen aus ca. 146 bp DNA, die um einen Histon-Oktamer (je zwei H2A, H2B, H3 und H4) gewickelt sind.
• Die Acetylierung an Lysin 14 von Histon H3 (H3K14ac) ist ein gut charakterisiertes epigenetisches Merkmal, das mit aktiv transkribierten Genen und offenen Chromatinregionen assoziiert ist. Sie wird hauptsächlich durch Histon-Acetyltransferasen wie GCN5/PCAF katalysiert und von Bromodomain-haltigen Proteinen erkannt. Verwandte Referenzen: PMID:16457588, PMID:16185088, PMID:16267050, PMID:17194708
• Das kanonische Histon H3.1 (kodiert durch mehrere Gene einschließlich HIST1H3A usw., SWISS P68431) wird während der S-Phase replikationsabhängig exprimiert und genomweit eingebaut. Im Gegensatz dazu ist Histon H3.1t (SWISS Q16695, Gen H3-4/HIST3H3) eine testisspezifische Variante, die während der Spermatogenese das kanonische H3 ersetzt.
• Sowohl H3.1 als auch H3.1t weisen einen hohen Grad an Sequenzidentität auf, einschließlich des N-terminalen Bereichs, der K14 enthält. Das Immunogen des Antikörpers, ein an K14 acetyliertes synthetisches Peptid, gewährleistet die spezifische Erkennung dieser Modifikation über beide Varianten hinweg.
• Die subzelluläre Lokalisierung von Histon H3 ist nukleär, wo es vorwiegend mit Chromosomen assoziiert ist. Die Gewebsspezifität für H3.1t ist auf Hodenzellen beschränkt, während H3.1 ubiquitär ist.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Immunogen-Design: Der Antikörper wurde gegen ein synthetisches, um K14 von menschlichem H3 acetyliertes Peptid hergestellt, was eine hohe Spezifität für die acetylierte Form gewährleistet. Wettbewerbsassays unter Verwendung von nicht-acetyliertem Peptid können eingesetzt werden, um die modifikationsspezifische Bindung zu bestätigen.
• Western Blotting (WB): Histon H3 wandert unter Standard-SDS-PAGE-Bedingungen bei ca. 15 kDa. Für eine optimale Detektion sollten Sie die Verwendung von Kernextrakten und einer milden Säureextraktion zur Anreicherung von Histonproteinen in Betracht ziehen. Fügen Sie immer geeignete positive und negative Kontrollen ein (z. B. Zellen, die mit Histon-Deacetylase-Inhibitoren behandelt wurden, im Vergleich zu unbehandelten).
• Chromatin-Immunopräzipitation (ChIP): Dieser Antikörper ist für ChIP-Anwendungen aufgeführt; jedoch kann je nach Zielgenomregion und Zelltyp eine Optimierung der Vernetzung, der Chromatin-Scherung und der Antikörperkonzentration erforderlich sein.
• Immunfluoreszenz/Immunhistochemie (IF/IHC): Eine Kernfärbung wird erwartet. Für Paraffin-eingebettete Schnitte (IHC-P) ist möglicherweise eine Antigen-Retrieval erforderlich. Validieren Sie die Antikörperspezifität mit Blockierungspeptiden oder durch Vergleich mit Isotypkontrollen.
• Spezies-Reaktivität: Der Antikörper kreuzreagiert mit Mensch, Maus und Ratte aufgrund der hohen Sequenzkonservierung um K14. Für andere Spezies überprüfen Sie bitte die Sequenzausrichtung vor der Verwendung.
• Allgemein: Als kaninchen monoklonaler Antikörper bietet er hohe Affinität, Charge-zu-Charge-Konsistenz und einen geringen Hintergrund. Lagern Sie bei -20°C und vermeiden Sie wiederholte Gefrier-Auftau-Zyklen.

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