Acetyl-DNMT1 (K1127/K1129/K1131/K1133) Kaninchen-Polyklonaler Antikörper (P26358) für IHC-P, IF/ICC, ELISA

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: DNA (Cytosin-5)-Methyltransferase 1 Funktion und Lokalisation

DNMT1 ist eine kritische DNA-Methyltransferase, die für die Aufrechterhaltung von CpG-Methylierungsmustern während der DNA-Replikation verantwortlich ist und so die epigenetische Vererbung sicherstellt. Sie methyliert bevorzugt hemimethylierte DNA und assoziiert in der S-Phase mit Replikationsfoci, wirkt aber auch unabhängig von der Replikation während der G2- und M-Phase, um globale Methylierungslandschaften zu bewahren. Die durch DNMT1 vermittelte Stummschaltung beinhaltet eine direkte Interaktion mit HDAC2 und die Bildung von Corepressor-Komplexen, die Histonmodifikationen und die Genexpression modulieren. Verwandte Referenzen: PMID:17200670, PMID:18754681, PMID:21745816, PMID:26070743, PMID:10888872, PMID:24623306

Das Enzym lokalisiert überwiegend im Zellkern und wird über seine RFTS-Domäne, die ubiquitiniertes Histon H3 erkennt, an Chromatin an Replikationsfoci rekrutiert. Es lokalisiert auch in perinukleolären Regionen, was spezialisierte Funktionen bei der Erhaltung von Heterochromatin widerspiegelt. Verwandte Referenzen: PMID:12145218, PMID:24492612, PMID:29053958

DNMT1 wird ubiquitär exprimiert, mit besonders hohen Spiegeln in fetalen Geweben, Herz, Niere, Plazenta und peripheren mononukleären Blutzellen, und geringerer Expression in Milz, Lunge, Gehirn, Dünndarm, Kolon, Leber und Skelettmuskel. Verwandte Referenzen: PMID:10325416

Posttranslationale Modifikationen von DNMT1, insbesondere Acetylierung, spielen wichtige regulatorische Rollen. Der von diesem Antikörper anvisierte Lysin-Cluster (K1127/K1129/K1131/K1133 in Isoform 1) entspricht bekannten Acetylierungsstellen (K1111/K1113/K1115/K1117/K1119/K1121 in der kanonischen Sequenz), die durch Histonacetyltransferasen modifiziert werden und die Proteinstabilität, Lokalisation und Interaktion mit anderen epigenetischen Faktoren beeinflussen können. Verwandte Referenzen: PMID:21947282, PMID:19608861

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Dieser Kaninchen-polyklonale Antikörper wurde gegen ein synthetisches acetyliertes Peptid gerichtet, das K1127, K1129, K1131 und K1133 von humanem DNMT1 umfasst. Es wird erwartet, dass er spezifisch die acetylierte Form des Proteins erkennt.
• Für IHC-P können Standard-Antigen-Retrieval-Methoden (z.B. hitzeinduziertes Epitop-Retrieval in Citratpuffer, pH 6.0) erforderlich sein, um das Epitop freizulegen. Die optimale Antikörperverdünnung und Inkubationsbedingungen sollten empirisch bestimmt werden.
• Bei der Durchführung von IF/ICC wird häufig eine Fixierung mit 4% Paraformaldehyd gefolgt von einer Permeabilisierung mit 0,1% Triton X-100 verwendet; diese Schritte müssen jedoch im spezifischen Zell- oder Gewebesystem validiert werden.
• ELISA kann zum Nachweis und zur Quantifizierung von acetyliertem DNMT1 in Zelllysaten oder Gewebeextrakten verwendet werden. Erwägen Sie die Verwendung eines Peptid-Kompetitionsassays, um die Bindungsspezifität zu bestätigen.
• Da DNMT1 weit verbreitet exprimiert wird, sollten geeignete positive und negative Kontrollen (z.B. Gewebe oder Zelllinien mit bekanntem Acetylierungsstatus) eingeschlossen werden, um die Färbemuster zu verifizieren.
• Das vorhergesagte Molekulargewicht beträgt 183 kDa; wenn der Antikörper für nicht validierte Anwendungen (z.B. Western Blot) umfunktioniert wird, validieren Sie die Bandengröße und Spezifität entsprechend.

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