Welche Fluorochromauswahl und Gating-Strategien sind für die CD4/CD8-T-Zell-Immunphänotypisierung erforderlich?

Eine erfolgreiche CD4/CD8-T-Zell-Immunphänotypisierung beginnt mit einer sorgfältig abgestimmten Kombination aus Fluorochromen und Antikörpern, gefolgt von einer konsequenten Gating-Hierarchie, die die interessierende Lymphozytenpopulation isoliert. Sie benötigen mindestens Anti-CD45, Anti-CD3, Anti-CD4 und Anti-CD8, konjugiert mit Fluorochromen, die eine minimale spektrale Überlappung aufweisen—klassische Auswahlmöglichkeiten sind FITC, PE und APC oder Texas Red—und müssen eine sequenzielle Strategie anwenden: Zuerst werden mithilfe von Vorwärts-/Seitwärtsstreuung Zelltrümmer und Aggregate ausgeschlossen, anschließend werden CD45+-Leukozyten (oder direkt Lymphozyten anhand der Streuung) gegatet, danach CD3+-T-Zellen isoliert und schließlich CD4 gegen CD8 aufgetragen, um das Verhältnis und die absoluten Zellzahlen zu bestimmen.